哈嘍哈嘍小編又來了，上期在《高效液相色譜日常維護(hù)要點(diǎn)-脫氣》中具體給大家介紹了為什么需要脫氣的具體原因和脫氣一些常規(guī)方法，那么今天就帶大家具體了解下高效液相色譜必不可少的步驟—過濾。

任何顆粒物進(jìn)入HPLC系統(tǒng)后都會在柱子入口端被篩板擋住，更后的結(jié)果是將柱子堵塞，一般表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形，從而導(dǎo)致檢測不能正常進(jìn)行。因此，要采取各種預(yù)防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設(shè)計(jì)，努力防止或減少顆粒物進(jìn)入HPLC系統(tǒng)中，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命，并提高數(shù)據(jù)的可靠性。

小編做了簡單總結(jié)，一般在HPLC系統(tǒng)中，顆粒物的主要來源有三個(gè)途徑：被測樣品、流動相和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。

液相系統(tǒng)中的di一類顆粒物來源是被測樣品。有過實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的小伙伴都知道，在將樣品上機(jī)之前，所有樣品都先通過一個(gè)0.45μm針筒式過濾器過濾。這是一個(gè)有效除去被測樣品中顆粒物的方法。但是這個(gè)過程也有一點(diǎn)美中不足就是：在使用針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會有或多或少的丟失。

02 流動相

液相系統(tǒng)中的第二類顆粒物來源是流動相。如果HPLC系統(tǒng)中存在顆粒雜質(zhì)，那么系統(tǒng)中的幾個(gè)部件都不可以良好地運(yùn)行。這些部件包括比例閥、止回閥、管路和色譜柱的濾頭。由于這個(gè)原因，使用沒有顆粒雜質(zhì)的流動相非常重要。如果不是使用HPLC級別的溶劑作為流動相。那么流動相的組成成分必須在加入儲液瓶之前經(jīng)過過濾。對于那些受監(jiān)管的工作環(huán)境，應(yīng)該有一份標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)的書寫文檔，說明什么時(shí)候有必要對流動相進(jìn)行額外過濾，什么時(shí)候不必要。

使用預(yù)先過濾過的溶劑是避免雜質(zhì)顆粒進(jìn)入流動相的更簡單的方法。市場上銷售的HPLC級別的溶劑在包裝前預(yù)先經(jīng)過亞微粒(通常為0.2μm)過濾器過濾。實(shí)驗(yàn)室里(比如Milli-Q水凈化處理)準(zhǔn)備的HPLC級別的水更后一步要通過0.2μm的過濾器過濾。如果在流動相里只用HPLC級別的液體，一般共識的就是不需要在使用之前操作任何額外的過濾程序。然而，假如使用的是非HPLC級別的試劑或者在流動相里加入了任何固體的試劑(比如磷酸鹽緩沖劑)，那么更明智的做法就是在使用之前過濾所有的流動相混合物。

流動相可以很容易地通過流動相真空抽濾裝置來過濾。一般步驟是首先將微孔濾膜(通常孔徑0.5μm)放置在漏斗和真空燒瓶之間的支撐濾頭上。然后把溶劑倒入漏斗然后在真空泵的協(xié)助之下，收集(過濾后的)溶劑。抽濾器生產(chǎn)商為不同的過濾應(yīng)用提供了合適的過濾器材料的選擇指導(dǎo)。比如，PTFE微孔濾膜具有疏水性，適用于純有機(jī)溶劑，比如甲醇或者乙腈，但因?yàn)榉菢O性很強(qiáng)因此不適用于快速過濾水。真空燒瓶之間的密封材料是用磨砂玻璃制成的，或者是一種“惰性”的瓶塞(比如硅酮)，但是更好還是不要讓流動相和瓶塞接觸。

03 儀器系統(tǒng)部件的磨損物

更后，在HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一類主要來源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。

di一種建議認(rèn)為：在一般實(shí)驗(yàn)室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個(gè)月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊。

第二種建議認(rèn)為：原裝密封墊的密封效果更好，更換以后容易引起流動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。

到此為什么需要過濾的具體原因和日常過濾的具體方法，在這里就差不多介紹完了。下期小編將繼續(xù)帶領(lǐng)大家去具體了解高效液相色譜日常維護(hù)要點(diǎn)—沖洗。