相信有實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的小伙伴都知道，高效液相色譜(HPLC)和超高效液相色譜(UPLC)是實(shí)驗(yàn)室常用的組分分離技術(shù)。鑒于他們有共同功能，許多小伙伴可能很難區(qū)分這兩者。下面小編將通過淺談HPLC和UPLC的區(qū)別來帶領(lǐng)小伙伴們簡單了解兩者的差異。

高效液相色譜定義

高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。

超高效液相色譜定義

超高效液相色譜（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）借助于HPLC（高效液相色譜）的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。

超高效液相色譜法的原理與高效液相色譜法

基本相同，所改變的地方有以下幾點(diǎn)：

1）小顆粒、高性能微粒固定相的出現(xiàn)。 高效液相色譜的色譜柱，例如常見的十八烷基硅膠鍵合柱，它的粒徑是5μm或者3μm，而超高效液相色譜的色譜柱會(huì)達(dá)到1.8μm，甚至1.7μm。這樣的粒徑更加利于物質(zhì)分離。

2）超高壓輸液泵的使用。由于使用的色譜柱粒徑減小，使用時(shí)所產(chǎn)生的壓力也自然成倍增大。故液相色譜的輸液泵也相應(yīng)改變成超高壓的輸液泵。

3）使用低擴(kuò)散、低交叉污染自動(dòng)進(jìn)樣器。配備了針內(nèi)進(jìn)樣探頭和壓力輔助進(jìn)樣技術(shù)。

4）高速采樣速度的靈敏檢測器。

5）儀器整體系統(tǒng)優(yōu)化設(shè)計(jì)。色譜工作站配備了多種軟件平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)超高效液相分析方法與高效液相分析方法的自動(dòng)轉(zhuǎn)換。

與傳統(tǒng)的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它縮短了分析時(shí)間，同時(shí)減少了溶劑用量降低了分析成本。

不過由于實(shí)驗(yàn)過程中儀器內(nèi)部壓力過大，也會(huì)產(chǎn)生相對(duì)應(yīng)的問題。例如泵的使用壽命會(huì)相對(duì)降低，儀器的連接部位老化速度加快，包括單向閥等部位零件容易出現(xiàn)問題等。

應(yīng)用

由于其更高的靈敏度，UPLC可以用于更復(fù)雜的樣品，并且這些樣品中各種成分的量可能更少。一些例子包括膳食補(bǔ)充劑和生物樣本。另一方面，高效液相色譜用于相對(duì)更簡單的應(yīng)用，例如水的凈化和藥物中雜質(zhì)的檢測。